Perbedaan Antara Stacking Gel dan Separating Gel

Perbedaan Utama - Stacking Gel vs Separating Gel
 

Istilah stacking gel dan separating gel digunakan dalam menjelaskan teknik SDS-PAGE. SDS-PAGE atau elektroforesis gel natrium dodesil sulfat-poliakrilamida adalah teknik laboratorium yang digunakan untuk memisahkan molekul protein berdasarkan berat molekulnya. Teori di balik teknik ini adalah bahwa protein dengan berat molekul berbeda menunjukkan tingkat migrasi yang berbeda; molekul dengan berat molekul rendah bermigrasi lebih cepat sedangkan molekul dengan berat molekul tinggi bermigrasi secara lambat. Media untuk migrasi adalah gel. Ada dua jenis gel yang dinamakan stacking gel dan separating gel. Itu perbedaan utama antara stacking gel dan separating gel adalah itu pH gel susun adalah 6,8 sedangkan pH gel pemisah 8,8.

ISI

1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa itu Stacking Gel
3. Apa itu Gel Pemisah
4. Hubungan Antara Stacking Gel dan Separating Gel
5. Perbandingan Berdampingan - Stacking Gel vs Separating Gel dalam Bentuk Tabular
6. Ringkasan

Apa itu Stacking Gel??

Stacking gel adalah gel poliakrilamida terkonsentrasi rendah yang ditempatkan di atas gel penyelesaian (gel pemisah) yang lebih terkonsentrasi dalam teknik SDS-PAGE. Gel susun digunakan untuk meningkatkan resolusi elektroforesis. Resolusi meningkat karena perbedaan antara konsentrasi gel susun dan gel penyelesaian yang berpengaruh pada protein dalam sampel. Karena konsentrasi poliakrilamida dalam susun gel rendah, ukuran pori lebih tinggi. Ini juga membantu meningkatkan pemisahan.

Gel susun adalah gel poliakrilamida longgar dengan pori-pori besar sekitar 7% poliakrilamida. Pori-pori ini tidak bertindak sebagai penghalang yang cukup besar untuk molekul protein besar. Karenanya gel ini sedikit memengaruhi mobilitas protein-protein tersebut. Hal ini membuat pemisahan sesuai dengan mobilitas dan ukuran protein dengan memusatkannya di antara dua gel.

Gambar 01: SDS-PAGE Acrylamide Gel

PH gel susun adalah 6,8. PH-nya bersifat asam dibandingkan dengan gel penyelesaian sebesar 2 unit pH. PH ini menyiratkan kekuatan ionik yang lebih rendah karenanya resistensi listrik yang lebih tinggi. Ini memprovokasi mobilitas protein daripada partikel bermuatan lain yang ada dalam gel.

Apa itu Gel Memisahkan?

Gel pemisah atau gel penuntas dari teknik SDS-PAGE adalah gel poliakrilamid yang sangat pekat yang ditempatkan di atas gel penumpukan berkonsentrasi rendah. Gel pemisah mengandung sejumlah besar poliakrilamida (10%). PH gel ini dipertahankan sebagai pH = 8,8, yang merupakan tingkat pH lebih tinggi daripada gel susun.

Gambar 02: Alat Elektroforesis Gel

Ketika molekul protein mencapai gel pemisah, migrasi molekul-molekul itu melambat karena gel pemisah adalah gel konsentrasi tinggi dengan ukuran pori kecil yang dapat bertindak sebagai penghalang yang cukup untuk pergerakan molekul protein. Perlambatan ini memungkinkan protein lain bermigrasi secara perlahan untuk mengejar ketinggalan, menghasilkan pita sempit dan terkonsentrasi di antara kedua gel.

Apa Hubungan Antara Stacking Gel dan Separating Gel?

• Jenis Stacking Gel dan Separating Gel digunakan pada peralatan yang sama.

Apa Perbedaan Antara Stacking Gel dan Separating Gel?

Stacking Gel vs Separating Gel
Stacking gel adalah gel poliakrilamid terkonsentrasi rendah yang ditempatkan di atas gel penyelesaian lebih terkonsentrasi (memisahkan gel) dalam teknik SDS-PAGE.	Gel pemisah atau gel penyelesai dari teknik SDS-PAGE adalah gel poliakrilamida yang sangat pekat yang ditempatkan di atas gel penumpukan terkonsentrasi rendah.
Penempatan
Gel penumpukan ditempatkan pada gel penyelesai (pemisah).	Gel pemisah ditempatkan di bagian bawah wadah yang digunakan untuk elektroforesis gel.
Konsentrasi
Konsentrasi penumpukan gel tinggi.	Konsentrasi gel pemisah rendah.
Konten Poliakrilamida
Gel susun mengandung sekitar 7% poliakrilamida.	Gel pemisah mengandung sekitar 10% poliakrilamida.
pH
PH gel susun adalah 6,8.	PH gel pemisah adalah 8,8.
Ukuran Pori
Ukuran pori besar hadir dalam susun gel.	Ukuran pori kecil hadir dalam memisahkan gel.
Resolusi
Penumpukan gel memberikan resolusi yang lebih baik.	Gel yang terpisah memberikan resolusi yang buruk.

Ringkasan - Stacking Gel vs Separating Gel

Stacking gel dan separating gel adalah dua jenis gel poliakrilamida yang digunakan untuk mendapatkan pemisahan molekul protein yang lebih baik dalam sampel yang diberikan. Perbedaan antara stacking gel dan separating gel adalah bahwa pH dari stacking gel adalah 6.8 sedangkan pH dari separating gel adalah 8.8.

Referensi:

1. "Elektroforesis Gel Poliakrilamid." Elektroforesis Gel Poliakrilamid (Teori): Biologi Molekuler Lab Virtual II: Bioteknologi dan Teknik Biomedis: Amrita Vishwa Vidyapeetham Virtual Lab. Tersedia disini  
2. “Bagaimana SDS-PAGE Bekerja.” Bitesize Bio, 16 Feb. 2018. Tersedia di sini
3. “Gel susun SDS-PAGE - BICH 608 (Polymenis-Pettigrew).” Situs Google. Tersedia disini 

Gambar milik:

1.'SDS-PAGE Acrylamide gel'By Bensaccount di Wikipedia bahasa Inggris, (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia  
2. 'Apar elektroforesis Gel' Oleh Jeffrey M. Vinocur - Pekerjaan sendiri, (CC-BY 2.5) melalui Commons Wikimedia