Perbedaan Antara Halaman SDS dan Western Blot

Perbedaan Utama - Halaman SDS vs Western Blot
 

Western blotting adalah teknik yang mendeteksi protein tertentu dari sampel protein. Teknik ini dilakukan melalui beberapa langkah kunci: elektroforesis gel, blotting, dan hibridisasi. Elektroforesis gel natrium dodesil sulfat poliakrilamid (SDS Page) adalah sejenis teknik elektroforesis gel yang digunakan untuk memisahkan protein sesuai dengan ukurannya (bobot molekul). Western blot adalah lembaran khusus membran blotting yang digunakan untuk mentransfer pola protein yang sama di SDS. Perbedaan utama antara SDS Page dan western blot adalah itu SDS Page memungkinkan pemisahan protein dalam suatu campuran sementara western blot memungkinkan deteksi dan kuantifikasi protein spesifik dari suatu campuran. Keduanya berguna dalam studi analisis protein.

ISI
1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa itu SDS Page
3. Apa itu Western Blot
4. Perbandingan Berdampingan - Halaman SDS vs Western Blot
5. Ringkasan

Apa itu SDS Page?

SDS Page adalah teknik elektroforesis gel yang digunakan untuk pemisahan protein. Ini umumnya digunakan dalam biokimia, genetika, forensik dan biologi molekuler. Setelah protein diekstraksi dari sampel, mereka dijalankan pada gel yang terbuat dari SDS dan poliakrilamida. SDS adalah deterjen anionik yang digunakan untuk linierisasi protein (protein denaturasi) dan untuk memberikan muatan negatif untuk protein linierisasi sebanding dengan massa molekulnya. Poliakrilamida menjadi penopang yang kuat untuk gel. Protein terdenaturasi yang bermuatan negatif bermigrasi ke arah ujung positif aparatus melalui gel. Menurut ukuran protein, kecepatan migrasi berbeda antara protein dan pemisahan terjadi. Oleh karena itu, halaman SDS berguna untuk pemisahan protein individu berdasarkan ukurannya.

Persiapan gel poliakrilamida untuk fraksinasi protein adalah langkah penting dalam SDS. Konsentrasi poliakrilamida yang benar dan jenis zat pengikat-silang yang digunakan sangat memengaruhi sifat fisik gel, yang membuat pemisahan aktual dari berbagai protein. Ukuran pori gel harus dikelola dengan benar untuk pemisahan yang efektif. Namun, SDS Page dianggap sebagai teknik pemisahan protein resolusi tinggi.

Teknik SDS Page memiliki keterbatasan utama dalam analisis protein. Karena SDS mendenaturasi protein sebelum pemisahan, itu tidak memungkinkan deteksi aktivitas enzimatik, interaksi pengikatan protein, kofaktor protein, dll.

Gambar 01: Halaman SDS

Apa itu Western Blot?

Teknik western blotting memungkinkan deteksi protein tertentu dari campuran protein dan pengukuran kuantitas dan berat molekul protein. Western blot adalah membran yang digunakan selama prosedur blotting untuk mendapatkan bayangan cermin dari pola protein dalam gel SDS-polyacrylamide. Membran yang digunakan untuk western blotting sebagian besar terdiri dari nitroselulosa atau polivinilidena difluorida (PVDF). Membran dengan protein yang ditransfer dapat digunakan untuk mengidentifikasi protein yang diinginkan. Dibutuhkan antibodi berkualitas tinggi untuk mendeteksi protein yang diinginkan melalui hibridisasi. Antibodi berikatan dengan antigen spesifiknya dan mengungkapkan keberadaan antigen yang diinginkan yaitu protein.

Pemindahan protein dari gel poliakrilamid SDS ke western blot dilakukan dengan cara elektrobloting. Ini adalah metode yang efektif dan cepat yang menyebabkan protein menjadi elektroforesis keluar dari gel dan meneruskannya ke membran nitroselulosa (western blot).

Gambar 02: Western Blot

Apa perbedaan antara Halaman SDS dan Western Blot?

Halaman SDS vs Western Blot
SDS Page adalah teknik elektroforesis gel.	Western blot adalah teknik yang dilakukan pada membran untuk mendeteksi protein tertentu dari suatu campuran.
Menggunakan
Halaman SDS memungkinkan pemisahan protein sesuai dengan ukurannya.	Western blot memungkinkan transfer protein pada gel halaman SDS tanpa mengubah polanya & memungkinkan hibridisasi dengan antibodi spesifik.
Kekurangan
Denaturasi protein, biaya tinggi, dan keberadaan bahan kimia neurotoxin adalah kelemahan dari teknik ini.	Teknik ini memakan waktu dan membutuhkan pengalaman pribadi dan kondisi terkontrol yang baik.

Ringkasan - Halaman SDS vs Western Blot

Halaman SDS dan western blot adalah dua metode yang terlibat dalam analisis protein. SDS Page memungkinkan pemisahan protein pada gel sesuai dengan berat molekulnya. Western blot membantu mengonfirmasi keberadaan dan kuantitas protein tertentu melalui hibridisasi dengan antibodi spesifik. Ini adalah perbedaan antara SDS Page dan western blot.

Referensi:
1. Blancher, C., dan A. Jones. "SDS-HALAMAN dan Teknik Blotting Barat." Metode dalam pengobatan molekuler. Perpustakaan Kedokteran Nasional A.N., n.d. Web. 27 Maret 2017
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig, dan David H. Petering. "Native SDS-PAGE: Pemisahan Protein Elektroforesis Resolusi Tinggi Dengan Retensi Properti Asli Termasuk Ion Logam Terikat." Metallomics: ilmu biometal terintegrasi. Perpustakaan Kedokteran Nasional A.S., Mei 2014. Web. 27 Maret 2017.

Gambar milik:
1. "Elektroforesis SDS-PAGE" Oleh Bensaccount di Wikipedia bahasa Inggris (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia
2. "Western blot 114A" Oleh Amanthabagdon - Karya sendiri (Domain Publik) melalui Commons Wikimedia