Perbedaan Antara Halaman SDS dan Halaman Asli

Perbedaan Utama - Laman SDS vs Asli Halaman
 

SDS dan halaman asli adalah dua jenis teknik elektroforesis gel poliakrilamid yang digunakan dalam Biologi Molekuler. Itu perbedaan utama antara SDS Page dan Native Page adalah jenis gel poliakrilamid yang digunakan. Dalam SDS Page gel denaturasi digunakan karena itu, molekul dipisahkan berdasarkan berat molekulnya. Sebaliknya, di Native Page, gel non-denaturasi digunakan. Karena itu, molekul dipisahkan berdasarkan ukuran, muatan, dan bentuknya.

Poliakrilamida Gel Elektroforesis (Halaman) menggunakan gel yang dibuat dengan mempolimerisasi monomer akrilamida dengan metilena bisakrilamida. Poliakrilamida lebih keras dan lebih stabil terhadap panas daripada agarosa. Gel poliakrilamida memiliki ukuran pori yang lebih kecil yang memungkinkan pemisahan protein secara efisien. Ada dua jenis utama pengaturan Halaman yaitu Halaman SDS dan Halaman Asli. Halaman SDS atau Elektroforesis gel Sodium-Dodecyl Sulfate Polyacrylamide memisahkan protein berdasarkan berat molekulnya. Gel denaturasi digunakan dalam SDS Page. Native Page menggunakan gel non-denaturasi dan memisahkan protein berdasarkan ukuran, muatan, dan bentuknya (konformasi 3D).

ISI

1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa itu SDS Page
3. Apa yang dimaksud dengan Native Page
4. Kesamaan Antara Halaman SDS dan Halaman Asli
5. Perbandingan Berdampingan - Halaman SDS vs Halaman Asli dalam Bentuk Tabular
6. Ringkasan

Apa itu SDS Page?

SDS Page adalah teknik elektroforesis yang paling umum digunakan untuk memisahkan protein berdasarkan berat molekulnya. Gel dibuat dengan menambahkan SDS (Sodium dodecyl sulfate), yang merupakan deterjen. SDS menggigit protein menjadi monomer. SDS adalah deterjen anionik. Oleh karena itu, ia menambahkan muatan negatif bersih ke protein dalam kisaran pH yang luas. Ketika muatan negatif bersih diberikan pada molekul protein, karena variasi muatan, struktur kompleks dipecah. Karena muatan negatif, protein menarik menuju ujung positif. Dengan demikian molekul dengan berat molekul lebih rendah bergerak lebih cepat pada matriks gel dan dapat diamati dekat dengan anoda, sedangkan protein dengan berat molekul lebih tinggi diamati lebih dekat ke sumur..

Gambar 01: Halaman SDS

Pengikatan SDS ke rantai polipeptida sebanding dengan massa molekul relatifnya. Oleh karena itu, massa molekul juga dapat ditentukan melalui SDS Page. Pewarnaan gel SDS Page dilakukan dengan pewarnaan bromophenol blue. Aplikasi rentang halaman SDS pada tingkat yang lebih besar di mana dapat digunakan untuk memperkirakan massa molekul relatif dan untuk menentukan kelimpahan relatif protein dalam campuran protein. Halaman SDS juga dapat digunakan untuk menentukan distribusi protein dalam campuran protein. Halaman SDS juga diterapkan untuk memurnikan dan menilai protein. Ini digunakan sebagai prosedur awal untuk blotting dan hibridisasi barat, yang pada gilirannya digunakan untuk pemetaan dan identifikasi protein.

Apa itu Native Page??

Elektroforesis gel Poliakrilamid Asli (Halaman Asli) menggunakan gel non-denaturasi. Oleh karena itu, SDS atau agen denaturasi lainnya tidak ditambahkan ke matriks gel. Dalam Native Page, pemisahan protein didasarkan pada muatan dan ukuran protein. Oleh karena itu, mobilitas protein tergantung pada muatan dan ukuran protein.

Muatan protein tergantung pada rantai samping asam amino. Jika rantai samping bermuatan negatif, protein akan menerima muatan negatif keseluruhan dan sebaliknya. Protein mempertahankan konformasi 3D karena lipatan yang terjadi. Lipat hasil dari beberapa jenis ikatan dalam protein seperti ikatan disulfida, interaksi hidrofobik dan ikatan Hidrogen. Oleh karena itu, jika Halaman asli dilakukan pada pH netral, protein akan dipisahkan sesuai dengan bentuk molekul protein. Oleh karena itu, Native Page dapat digunakan sebagai teknik sensitif untuk mendeteksi perubahan muatan atau konformasi protein.

Keuntungan utama Page asli adalah bahwa protein yang digunakan untuk analisis Page dapat dipulihkan dalam keadaan aslinya setelah analisis Page, karena protein tersebut tidak terganggu selama proses. Native Page adalah teknik throughput yang relatif tinggi, dan stabilitas protein meningkat.

Gambar 02: Halaman Asli

Setelah selesai menjalankan gel, gel Halaman Asli dapat dilihat dengan pewarnaan dengan bromophenol biru atau reagen pewarnaan lainnya yang sesuai. Aplikasi Native Page mencakup pemisahan protein asam termasuk glikoprotein seperti erythropoietin rekombinan manusia atau identifikasi protein yang ada dalam Bovine Serum Albumin (BSA).

Apa Persamaan Antara Halaman SDS dan Halaman Asli?

• Kedua sistem SDS Page dan Native Page menggunakan gel poliakrilamida sebagai matriks gel.
• Keduanya digunakan untuk pemisahan dan identifikasi protein.
• Keduanya menggunakan mobilitas elektroforetik untuk memisahkan senyawa.
• Keduanya dapat dilakukan secara vertikal atau horizontal (sebagian besar dilakukan sebagai pengaturan Halaman vertikal karena panjang run lebih).
• Peralatan elektroforesis termasuk tangki gel, sisir, catu daya diperlukan untuk pengoperasian kedua teknik.
• Visualisasi gel dapat dilakukan dengan metode pewarnaan di kedua teknik.

Apa Perbedaan Antara Halaman SDS dan Halaman Asli?

Halaman SDS vs Halaman Asli
SDS Page atau Sodium-dodecyl sulfate Page memisahkan protein berdasarkan berat molekulnya, dan ia menggunakan gel denaturasi.	Native Page menggunakan gel non-denaturasi dan memisahkan protein berdasarkan ukuran, muatan, dan bentuknya (konformasi 3D).
Jenis Gel
Gel denaturasi digunakan dalam halaman SDS.	Gel non-denaturasi digunakan di halaman asli.
Kehadiran SDS
SDS hadir sebagai deterjen untuk memberikan muatan negatif pada sampel di halaman SDS.	SDS tidak ada di halaman asli.
Dasar Pemisahan
Pemisahan protein tergantung pada berat molekul protein di halaman SDS.	Pemisahan tergantung pada ukuran dan bentuk molekul protein di halaman asli.
Stabilitas Protein
Stabilitas protein rendah di halaman SDS.	Stabilitas protein tinggi di halaman asli.
Pemulihan Protein Asli
Tidak mungkin karena didenaturasi di halaman SDS.	Mungkin di halaman asli.

Ringkasan - SDS Page vs Native Halaman

SDS Page dan Native Page adalah dua jenis teknik elektroforesis gel Polyacrylamide yang digunakan untuk memisahkan protein. Halaman SDS diperlakukan dengan deterjen yang disebut SDS. SDS memberikan muatan negatif keseluruhan untuk protein, yang kemudian menghasilkan denaturasi protein. Oleh karena itu, protein dipisahkan berdasarkan berat molekulnya. Sebaliknya, teknik Native Page tidak menggunakan agen denaturasi apa pun. Dengan demikian protein dipisahkan berdasarkan ukuran atau bentuknya. Ini adalah perbedaan antara halaman SDS dan halaman asli.

Referensi:

1. "Prinsip dan Metode Elektroforesis Gel Poliakrilamid (SDS-PAGE)." Prinsip dan Metode Elektroforesis Gel Poliakrilamida (SDS-PAGE) | MBL Life Sience -ASIA-. Tersedia disini
2. "Gel Asli." Alliance Protein Laboratories | Layanan Karakterisasi Biofisik. Tersedia disini  

Gambar milik:

1.'SDS-PAGE Electrophoresis'By Bensaccount di Wikipedia bahasa Inggris, (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia  
2. 'Masukkan sampel ke dalam elektroforesis gel poliakrilamid dengan baik'Dengan Blaz Nemec dari Ljubljana, Slovenia (CC BY-SA 2.0) melalui Commons Wikimedia