Perbedaan Antara PCR dan PCR waktu-nyata

PCR vs PCR waktu-nyata

PCR atau Polymerase chain reaction adalah penemuan revolusioner dalam biologi molekuler modern, yang pertama kali dikembangkan oleh ahli kimia Kary Mullis pada tahun 1983. Reaksi ini memungkinkan sekuens tunggal dalam DNA kompleks untuk diperkuat untuk analisis. Ide dasar PCR adalah bahwa dua primer, yang saling melengkapi dengan untaian berlawanan dari urutan DNA, berorientasi satu sama lain; primer menghasilkan untaian komplementer, masing-masing berisi primer lainnya. Oleh karena itu, hasilnya adalah sejumlah besar urutan yang sesuai dengan DNA yang terletak di antara kedua primer. Enzim DNA polimerase digunakan untuk memperluas primer dalam PCR. DNA polimerase adalah enzim termostabil, dan memiliki kemampuan untuk bertahan hidup dalam suhu tinggi (94 hingga 95 ° C) yang digunakan untuk denaturasi DNA templat.

PCR melibatkan tiga langkah, yaitu putaran denaturasi berulang, anil primer, dan sintesis DNA. Mesin thermocycler digunakan untuk melakukan reaksi ini sehingga dapat diprogram untuk mengubah suhu dengan cepat dan akurat. Aplikasi PCR adalah investigasi kriminal, sidik jari DNA, deteksi patogen, dan analisis DNA spesies manusia purba.

Apa itu PCR Konvensional?

Ada tiga tahapan utama PCR konvensional, yaitu; Tahap amplifikasi DNA, pemisahan PCR, dan deteksi produk. Pemisahan segmen DNA biasanya dilakukan oleh elektroforesis gel agarosa. Produk tersebut kemudian diwarnai dengan etheiduim bromide. Akhirnya, deteksi dicapai dengan visualisasi pita ke gel di bawah sinar UV. Oleh karena itu, hasil akhir PCR konvensional tidak dinyatakan sebagai angka. Biasanya PCR konvensional hanya mampu mendeteksi satu parameter.

Apa itu PCR Real-time?

PCR real-time dapat mendeteksi amplifikasi produk, karena produk disintesis. Dengan perkembangan teknologi, PCR telah menjadi teknik yang sangat populer, terutama untuk deteksi dan identifikasi bakteri dalam makanan. PCR real-time menggunakan sistem pewarna florescent dan thermocycler yang dilengkapi dengan kemampuan pendeteksian fluoresen.

Apa perbedaan antara PCR Konvensional dan PCR Real-time?

• PCR konvensional lebih memakan waktu karena menggunakan elektroforesis gel untuk menganalisis produk PCR yang diperkuat. Sebaliknya, PCR waktu nyata lebih sedikit memakan waktu karena dapat mendeteksi amplifikasi selama fase awal reaksi.

• PCR waktu-nyata mengumpulkan data pada fase pertumbuhan eksponensial PCR sementara PCR tradisional mengumpulkan data pada titik akhir reaksi.

• Hasil titik akhir PCR konvensional mungkin tidak terlalu tepat, tetapi hasil PCR waktu-nyata sangat tepat.

• PCR waktu-nyata lebih sensitif daripada PCR konvensional.

• PCR konvensional memiliki resolusi sangat buruk sementara PCR waktu nyata dapat mendeteksi sangat sedikit perubahan karena resolusi tinggi.

• Deteksi titik akhir PCR konvensional memiliki rentang dinamis pendek sementara deteksi PCR real-time memiliki rentang dinamis luas.

• Tidak seperti PCR konvensional, teknik deteksi otomatis ditemukan dalam PCR waktu-nyata.

• PCR konvensional sangat canggih dan padat karya lebih dari PCR waktu-nyata.

• Tidak seperti PCR real-time, PCR konvensional tidak dapat membedakan antara bakteri mati dan bakteri hidup.

• PCR waktu-nyata menggunakan sistem pewarna fluoresen untuk mendeteksi produk sementara PCR konvensional menggunakan etidium bromida dan sinar UV untuk memvisualisasikan pita dalam media gel agarosa.