Perbedaan Antara Kertas Lapisan Tipis dan Kromatografi Kolom
Share
Perbedaan Utama - Kertas vs Lapisan Tipis vs Kolom Kromatografi
Kromatografi kertas, kromatografi lapis tipis, dan kromatografi kolom adalah tiga jenis teknik kromatografi. Itu perbedaan utama antara kertas kromatografi, kromatografi lapis tipis dan kromatografi kolom didasarkan pada jenis fase diam yang digunakan dalam teknik kromatografi. Kromatografi kertas menggunakan kertas selulosa sebagai fase diamnya, Kromatografi Lapis Tipis menggunakan alumina atau silika gel sebagai fase diamnya, sedangkan kromatografi kolom menggunakan kolom yang dikemas dengan bahan matriks yang cocok sebagai fase diamnya..
Dalam proses pemisahan dan identifikasi biomolekul seperti protein dan karbohidrat, kromatografi merupakan teknik biofisik penting yang digunakan. Kromatografi memisahkan senyawa berdasarkan kelarutan, ukuran dan muatannya. Berdasarkan mekanisme pemisahan, kromatografi menggunakan mekanisme seperti pertukaran ion, penyerapan, partisi dan ukuran pengecualian dan ada tiga teknik kromatografi; yaitu, kertas, lapisan tipis, dan kromatografi kolom. Kertas kromatografi didasarkan pada adsorpsi padat-cair dan kelarutan senyawa, dan menggunakan kertas selulosa sebagai fase diam. Kromatografi lapis tipis didasarkan pada adsorpsi molekul padat-cair. Ini memiliki fase diam yang biasanya terbuat dari alumina atau silika gel dan fase gerak yang merupakan pelarut. Kromatografi kolom menggunakan kolom yang dikemas dengan matriks yang digunakan untuk memisahkan molekul terutama berdasarkan ukuran, afinitas atau muatannya..
ISI
1. Ikhtisar Kromatografi dan Perbedaan Utama
2. Apa itu Kromatografi Kertas
3. Apa itu Kromatografi Lapis Tipis
4. Apa itu Kromatografi Kolom
5. Kesamaan Antara Kertas, Lapisan Tipis dan Kromatografi Kolom
6. Perbandingan Berdampingan - Kromatografi Kertas vs Lapisan Tipis vs Kolom dalam Bentuk Tabular
7. Ringkasan
Apa itu Kromatografi Kertas?
Kromatografi kertas adalah jenis kromatografi paling sederhana yang digunakan, dan tidak digunakan untuk penelitian yang luas. Ini terutama digunakan di laboratorium siswa untuk mengidentifikasi biomolekul seperti asam amino dan karbohidrat yang ada dalam campuran. Kromatografi kertas menggunakan fase diam yang dibuat menggunakan kertas selulosa atau kertas saring Whatman dan fase gerak yang biasanya dibuat menggunakan pelarut organik seperti n-butanol, dll. Fasa diam jenuh dengan air, membuat fasa diam stasioner. Jadi, ketika senyawa terlihat dan dibiarkan berjalan dengan adanya fase gerak, tergantung pada kelarutan senyawa, mereka dipisahkan. Dengan demikian, pada pengembangan kromatogram, pewarnaan dapat dilakukan untuk menentukan jangka panjang setiap senyawa. Dengan demikian faktor retensi dapat dihitung.
Gambar 01: Kromatografi Kertas
Kertas kromatografi dapat diklasifikasikan lebih lanjut sebagai kertas kromatografi menanjak dan kertas kromatografi menurun tergantung pada arah pelarut yang berjalan.
Apa itu Kromatografi Lapis Tipis?
Kromatografi lapis tipis atau TLC adalah teknik yang umum digunakan untuk mengidentifikasi berbagai asam amino yang ada dalam campuran atau untuk identifikasi protein. Teknik pemisahan didasarkan pada adsorpsi padat-cair. Selama kromatografi lapis tipis, piring yang terbuat dari alumina atau silika gel digunakan sebagai fase diam. Campuran pelarut bervariasi sesuai kebutuhan dan dapat menggunakan berbagai kombinasi senyawa organik seperti n-butanol, asam asetat, dan air untuk menyiapkan pelarut. Senyawa yang akan dipisahkan terlihat di piring dan direndam dalam campuran pelarut. Setelah pelarut bergerak naik berdasarkan aksi kapiler yang diberikan oleh pelat, senyawa yang terlihat di piring juga bergerak tergantung pada kelarutannya dalam pelarut..
Gambar 02: Kromatografi Lapis Tipis
Deteksi bintik-bintik setelah kromatogram dijalankan dilakukan dengan berbagai prosedur pewarnaan. Beberapa menggunakan pewarnaan ninhidrin yang merupakan metode pewarnaan yang beracun. Kromatogram lapis tipis modern menggunakan teknik fluoresensi untuk melihat kromatogram setelah dijalankan. Bergantung pada jarak yang ditempuh, waktu retensi setiap senyawa dapat dihitung. Ini dapat digunakan untuk mengidentifikasi jenis senyawa yang dipisahkan berdasarkan campuran yang digunakan. TLC terutama digunakan untuk mengidentifikasi asam amino dalam campuran protein dan juga untuk memisahkan berbagai jenis monosakarida yang ada dalam campuran.
Apa itu Kromatografi Kolom?
Kromatografi kolom adalah istilah luas yang digunakan untuk menggambarkan banyak jenis teknik kromatografi yang menggunakan metode pemisahan berbasis kolom. Dalam kromatografi kolom, kolom fisik digunakan dengan bahan pembungkus untuk memisahkan senyawa. Pemisahan dapat didasarkan pada sifat fisik yang berbeda yang ditunjukkan oleh senyawa. Properti ini dapat berupa muatan, ukuran, konformasi 3D, dan kapasitas pengikatan, dll. Dengan demikian, kolom yang dikemas dengan bahan matriks bertindak sebagai fase diam dan buffer pencuci yang diterapkan pada kolom bertindak sebagai fase gerak.
Jika molekul dipisahkan berdasarkan ukurannya, bahan pembungkusnya dikemas sedemikian rupa sehingga meninggalkan pori-pori untuk dilalui senyawa. Jadi, molekul yang lebih besar yang tidak dapat mengalir melalui pori-pori dielusi terlebih dahulu, sedangkan molekul yang lebih kecil membutuhkan waktu lebih lama untuk dielusi.
Gambar 03: Kromatografi Kolom
Jika molekul dipisahkan berdasarkan muatannya, fasa diam akan mengandung penukar anion atau kation di mana senyawa akan tertarik berdasarkan muatannya. Jadi selama tahap pencucian, senyawa yang tidak terikat akan dielusi. Setelah menambahkan buffer elusi, senyawa yang diikat akan dielusi. Deteksi eluen ini sebagian besar didasarkan pada teknik spektrofotometri.
Apa Persamaan Antara Lapisan Tipis Kertas dan Kromatografi Kolom?
- Semua Teknik Lapisan Tipis Kertas dan Kolom Kromatografi digunakan untuk pemisahan biomolekul seperti asam amino, protein, dan karbohidrat.
- Kertas Lapisan Tipis dan Teknik Kromatografi Kolom memiliki fase gerak dan fase diam.
- Kertas Lapisan Tipis dan Teknik Kolom Kromatografi menggunakan mekanisme biofisik untuk pemisahan.
Apa Perbedaan Antara Lapisan Tipis Kertas dan Kromatografi Kolom?
Kertas vs Lapisan Tipis vs Kromatografi Kolom | |
| Kromatografi Kertas | Paper chromatography adalah teknik kromatografi yang digunakan untuk memisahkan senyawa berdasarkan adsorpsi cair-cair dan kelarutan senyawa. Ia menggunakan kertas selulosa sebagai fase diamnya. |
| Kromatografi Lapis Tipis | Kromatografi lapis tipis adalah teknik kromatografi lain yang didasarkan pada adsorpsi molekul padat-cair. Ini memiliki fase diam yang terbuat dari alumina atau silika gel dan pelarut sebagai fase gerak, yang merupakan pelarut. |
| Kromatografi Kolom | Kromatografi kolom menggunakan kolom yang dikemas dengan matriks yang digunakan untuk memisahkan molekul terutama berdasarkan ukuran, afinitas atau muatannya.. |
| Tahap Stationary | |
| Kromatografi Kertas | Kertas yang terbuat dari nitroselulosa Whatman digunakan sebagai fase diam dalam kromatografi kertas. |
| Kromatografi Lapis Tipis | Alumina atau Silica gel digunakan sebagai fase diam kromatografi lapis tipis. |
| Kromatografi Kolom | Kolom yang dikemas dengan bahan pengemas yang sesuai digunakan sebagai fase diam dalam kromatografi kolom. |
| Fase Seluler | |
| Kromatografi Kertas | Running solvent adalah fase gerak dari kromatografi kertas. |
| Kromatografi Lapis Tipis | Running solvent adalah fase gerak kromatografi lapis tipis. |
| Kromatografi Kolom | Buffer pencuci adalah fase gerak dari kromatografi kolom. |
| Mekanisme yang Digunakan untuk Pemisahan | |
| Kromatografi Kertas | Kertas kromatografi didasarkan pada penyerapan padat-cair. |
| Kromatografi Lapis Tipis | Kromatografi lapis tipis didasarkan pada penyerapan padat-cair. |
| Kromatografi Kolom | Kromatografi kolom didasarkan pada pengecualian ukuran, muatan, dan bentuk. |
| Penyangga Elusi | |
| Kromatografi Kertas | Tidak diperlukan oleh kertas kromatografi. |
| Kromatografi Lapis Tipis | Tidak diperlukan untuk kromatografi lapis tipis. |
| Kromatografi Kolom | Diperlukan dalam kromatografi kolom. |
| Deteksi | |
| Kromatografi Kertas | Pewarnaan dan dengan menentukan faktor Retensi. |
| Kromatografi Lapis Tipis | Pewarnaan dan dengan menentukan faktor Retensi. |
| Kromatografi Kolom | Penentuan spektrofotometri. |
Ringkasan - Paper Thin Layer vs Kolom Kromatografi
Kertas kromatografi, TLC dan kromatografi kolom adalah teknik pemisahan yang digunakan untuk memisahkan biomolekul seperti protein, asam amino dan karbohidrat (terutama monosakarida). Kertas kromatografi menggunakan kertas selulosa sebagai fase diam, dan mekanisme pemisahan didasarkan pada adsorpsi padat-cair. TLC juga menggunakan mekanisme adsorpsi padat-cair. Molekul dipisahkan pada fase diam, tergantung pada kelarutannya dalam fase gerak. Kromatografi kolom menggunakan sifat fisik seperti ukuran, bentuk, muatan, dan berat molekul senyawa untuk memisahkan. Kolom yang dikemas dengan bahan matriks bertindak sebagai fase diam, sedangkan buffer pencuci bertindak sebagai fase pelarut. Ini adalah perbedaan antara lapisan tipis kertas dan kromatografi kolom.
Referensi:
1.Clark, Jim. "KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS." Thin Layer Chromatography, 2007. Tersedia di sini
2.Coskun, Ozlem. "Teknik Pemisahan: Kromatografi." Klinik Utara Istanbul, Penerbit Kare, 2016. Tersedia di sini
Gambar milik:
1. 'Tangki kromatografi' (CC BY-SA 3.0) melalui Commons Wikimedia
2. 'Urutan berurutan' oleh Quantockgoblin, (Domain Publik) melalui Commons Wikimedia
3. 'Kromatografi Kolom' (Domain Publik) melalui Commons Wikimedia
