Perbedaan Antara ELISA Langsung dan Tidak Langsung

Perbedaan Utama - ELISA Langsung vs Tidak Langsung
 

Enzim-linked immunoassay (ELISA), juga dikenal sebagai enzim immunoassay, adalah tes serologis yang mendeteksi antibodi dalam darah.. Ini digunakan sebagai alat diagnostik untuk mengetahui apakah pasien telah terpapar virus jenis tertentu atau agen infeksi lain (antigen) dan apakah tubuh telah menghasilkan antibodi terhadap infeksi. ELISA juga dapat mengidentifikasi infeksi masa lalu dan saat ini. Oleh karena itu, ELISA sering digunakan sebagai tes penyaringan oleh para dokter sebelum analisis penyakit secara mendalam. Tes ini dapat dilakukan di laboratorium dengan mengambil sampel darah dari pasien. Ada dua jenis tes ELISA: ELISA langsung dan ELISA tidak langsung. Perbedaan utama antara ELISA langsung dan tidak langsung adalah bahwa ELISA tidak langsung lebih sensitif dan membutuhkan penambahan antibodi sekunder sementara ELISA langsung kurang sensitif dan hanya menggunakan antibodi primer.

ISI
1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa itu ELISA Langsung
3. Apa itu ELISA Tidak Langsung
4. Perbandingan Berdampingan - ELISA Langsung vs Tidak Langsung
5. Ringkasan

Apa itu ELISA Langsung?

ELISA adalah tes diagnostik penyakit yang dilakukan untuk mengidentifikasi keberadaan antigen atau antibodi tertentu dalam darah. Ini dilakukan sebagai uji piring. Ia menggunakan antibodi yang dihubungkan dengan enzim yang mudah diuji. Kehadiran antigen dalam sampel serum berikatan dengan antibodi spesifik yang dikaitkan dengan enzim. Pada langkah terakhir, substrat khusus ditambahkan untuk bereaksi dengan enzim. Enzim mengubah substrat menjadi produk berwarna atau penghasil sinyal. Perubahan warna pada substrat kimia menunjukkan adanya antibodi tertentu dalam sampel serum. Tes ELISA langsung hanya menggunakan antibodi primer yang dikaitkan dengan enzim. Setelah mengikat ke antigen, itu dengan cepat mengubah warna, menunjukkan keberadaan agen infeksi dalam darah. Namun, intensitas sinyal lebih lemah pada ELISA langsung karena epitop terbatas pada pengikatan antigen. Oleh karena itu, ELISA langsung kurang sensitif dibandingkan dengan ELISA tidak langsung.

Gambar 01: Tes ELISA langsung

Apa itu ELISA Tidak Langsung?

ELISA dapat dilakukan dengan menggunakan dua jenis antibodi yaitu; antibodi primer dan antibodi sekunder. Alat ELISA tidak langsung menggunakan kedua jenis antibodi untuk memperkuat sinyal untuk deteksi yang lebih baik. Teknik ELISA tidak langsung dilakukan sebagai berikut.

1. Pelat diinkubasi dengan antigen dan dicuci untuk memblokir pengikatan spesifik.
2. Kemudian antibodi primer ditambahkan dan dicuci.
3. Antibodi sekunder yang terhubung dengan enzim ditambahkan dan dicuci.
4. Substrat ditambahkan dan dibiarkan bereaksi dengan enzim.
5. Sinyal terdeteksi, dan ada atau tidak adanya antigen spesifik dalam sampel diidentifikasi.

Dalam tes ELISA tidak langsung, beberapa antibodi sekunder dapat berikatan dengan satu antibodi primer. Antibodi sekunder dihubungkan dengan enzim yang mudah diuji. Oleh karena itu, satu ikatan dapat membuat sinyal yang kuat karena lebih dari satu interaksi. Oleh karena itu, ELISA tidak langsung lebih sensitif daripada ELISA langsung. Namun, ELISA tidak langsung dapat membuat sinyal tidak spesifik karena reaksi silang dari antibodi sekunder.

Gambar 02: Tes ELISA Tidak Langsung

Apa perbedaan antara ELISA Langsung dan Tidak Langsung?

ELISA langsung vs tidak langsung
ELISA langsung kurang sensitif dibandingkan dengan ELISA tidak langsung.	ELISA tidak langsung lebih sensitif.
Waktu Diambil
Tes ELISA langsung adalah proses cepat.	ELISA tidak langsung memakan waktu.
Penggunaan Antibodi
Hanya satu jenis antibodi (Antibodi primer) yang digunakan dalam ELISA langsung.	Antibodi primer dan sekunder digunakan untuk ELISA tidak langsung.
Tautkan dengan Enzim
Antibodi primer dihubungkan dengan enzim.	Antibodi sekunder dihubungkan dengan enzim.
Reaktivitas Lintas Antibodi Kedua
ELISA langsung menghilangkan reaktivitas silang dari antibodi kedua.	ELISA tidak langsung dipengaruhi oleh reaktivitas silang dari antibodi kedua.
Sinyal
Sinyal lemah dibandingkan dengan ELISA tidak langsung.	Sinyal diperkuat dalam ELISA tidak langsung. Karena itu, mudah dideteksi.

Ringkasan - ELISA langsung vs tidak langsung

ELISA adalah teknik biokimia yang digunakan terutama dalam imunologi untuk mendeteksi keberadaan antibodi atau antigen dalam sampel darah pasien. Ini dapat dilakukan melalui dua proses yang dikenal sebagai ELISA langsung atau tidak langsung. Tes ELISA langsung hanya menggunakan antibodi primer untuk mendeteksi antigen sementara ELISA tidak langsung menggunakan antibodi primer dan sekunder. Pada ELISA langsung, antibodi primer diberi label sedangkan pada ELISA tidak langsung, antibodi sekunder diberi label. Ini adalah perbedaan antara ELISA langsung dan tidak langsung.

Referensi
1. "Uji imunosorben terkait-enzim (ELISA)." Buletin Organisasi Kesehatan Dunia. Perpustakaan Kedokteran Nasional A.S., 1976. Web. 29 Maret 2017
2. Loon, A. M van, J. T Van Der Logt, F. W. Heessen, dan J. Van Der Veen. “Uji imunosorben terkait-enzim yang menggunakan antigen berlabel untuk deteksi antibodi imunoglobulin M dan A dalam toksoplasmosis: perbandingan dengan imunofluoresensi tidak langsung dan uji imunosorben terkait-enzim sandwich ganda.” Jurnal Mikrobiologi Klinik. Perpustakaan Kedokteran Nasional A.S., Juni 1983. Web. 29 Maret 2017

Gambar milik:
1. "Diagram ELISA" Oleh Cavitri - Pekerjaan sendiri (CC BY 3.0) melalui Commons Wikimedia 
2. “ELISA Tidak Langsung” Oleh Cawang - Pekerjaan sendiri (CC0) melalui Commons Wikimedia