Perbedaan Antara Tripsinisasi Hangat dan Dingin
Share
Perbedaan Kunci - Hangat vs. Dingin Tripsinisasi
Trypsinization Hangat dan Dingin adalah dua metode yang digunakan dalam disagregasi enzimatik sel dalam pembiakan sel hewan. Itu perbedaan utama antara trypsinization hangat dan dingin, seperti namanya, tergantung pada suhu di mana trypsin ditambahkan untuk disagregasi seluler. Tripsinisasi hangat terjadi pada kondisi suhu yang lebih tinggi (36.5 - 37 0C) sedangkan trypsinization dingin terjadi dalam kondisi suhu rendah.
Selama proses pembiakan sel primer sel hewan, ada tiga metode utama yang digunakan dan terbukti berhasil. Tiga metode termasuk disagregasi mekanis sel, disagregasi enzimatik sel dan teknik eksplan primer. Disagregasi enzimatik sel yang mengarah ke isolasi sel dan itu dilakukan oleh enzim tripsin protein yang merendahkan protein. Karena itu, proses ini dikenal sebagai Trypsinization. Tripsinisasi dapat dilakukan dalam dua kondisi berbeda yaitu Tripsinisasi Hangat dan Tripsinisasi Dingin. Tripsinisasi hangat adalah metode merawat sel dengan trypsin dalam kondisi hangat pada suhu 36,5 - 37 0C. Dingin trypsinization adalah proses pengobatan trypsin yang terjadi di bawah kondisi dingin terutama di es mempertahankan suhu yang sangat rendah.
ISI
1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa itu Warm Trypsinization
3. Apa itu Cold Trypsinization
4. Kesamaan Antara Trypsinisasi Hangat dan Dingin
5. Perbandingan Berdampingan - Trypsinization Hangat vs Dingin dalam Bentuk Tabular
6. Ringkasan
Apa itu Warm Trypsinization?
Tripsinisasi dapat dilakukan untuk memisahkan komponen seluler untuk mengisolasi sel untuk menghasilkan kultur sel primer. Tripsin adalah enzim degradasi protein, dan campuran enzim yang digunakan dalam tripsinisasi dapat berupa ekstrak kasar atau produk murni. Ekstrak kasar dikatakan lebih efisien dalam lisis protein dan disintegrasi sel karena mengandung enzim degradatif lainnya.
Tripsinisasi hangat adalah metode enzimatik yang paling umum digunakan untuk disagregasi sel yang terjadi dalam kondisi suhu yang lebih tinggi. Sebelum perawatan dengan trypsinization, jaringan yang diinginkan dipotong kecil-kecil. Ini memfasilitasi proses disagregasi yang mudah. Jaringan yang dipotong kemudian dicuci dalam media khusus yang dikenal sebagai media Dissection Basal Salt.
Setelah langkah pencucian selesai, sel-sel ditransformasikan menjadi labu berisi enzim aktif, yaitu trypsin. Karena teknik ini menyiratkan protokol trypsinization hangat, trypsin ditempatkan pada suhu sekitar 37 0C sekitar empat jam.
Gambar 01: Trypsin
Isi dicampur dan diaduk dengan menggunakan metode sentrifugasi untuk kemudahan protokol dan untuk mempercepat proses disagregasi. Setelah waktu yang disarankan tercapai, sel-sel dapat diturunkan dari supernatan. Sel-sel yang berasal dari supernatan kemudian diinkubasi pada suhu dan waktu tertentu.
Apa itu Trypsinization Dingin??
Tripsinisasi dingin adalah jenis tripsinisasi lain yang terjadi dalam kondisi dingin. Dalam teknik ini, sel-sel yang dicincang dan dicuci ditempatkan dalam botol di atas es dan kemudian direndam dengan tripsin. Masa berendam jauh lebih lama - sekitar 6 - 24 jam.
Setelah selesai prosedur perendaman, trypsin dikeluarkan dari sel lisat, dan potongan-potongan jaringan selanjutnya diinkubasi pada 37 0C sekitar 20 - 30 menit. Disagregasi sel disebabkan oleh pemipaan berulang dari campuran jaringan. Ini akan memungkinkan sel untuk terlepas dari membran dan sampai ke supernatan. Setelah sel berada di supernatan, mereka diinkubasi dan tumbuh pada suhu dan periode waktu yang diinginkan.
Metode trypsinization dingin memiliki beberapa keunggulan
- Hasil yang lebih tinggi dari sel-sel yang layak karena kerusakan sel diminimalkan. Kerusakan sel diminimalkan dengan tidak menggunakan langkah-langkah sentrifugasi.
- Metode yang sangat nyaman.
- Kurang melelahkan.
Keterbatasan utama dari metode trypsinization dingin adalah bahwa jumlah besar tidak dapat digunakan dalam satu contoh.
Apa Persamaan Antara Trippsinisasi Hangat dan Dingin?
- Baik proses Trypsinization Hangat dan Dingin menggunakan enzim trypsin untuk disagregasi sel.
- Baik proses Trypsinization Hangat dan Dingin digunakan dalam prosedur kultur sel untuk disagregasi sel.
- Baik dalam prosedur pengobatan Trypsinization Hangat dan Dingin, sel-sel tersebut berasal dari supernatan.
Apa Perbedaan Antara Tripsinisasi Hangat dan Dingin?
Warm vs Cold Trypsinization | |
| Tripsinisasi hangat adalah metode merawat sel dengan trypsin dalam kondisi hangat pada suhu 36,5 - 37 0. | Cold trypsinization adalah proses perawatan trypsin yang berlangsung di bawah kondisi yang lebih dingin, lebih disukai dalam es yang mempertahankan suhu sangat rendah. |
| Protokol | |
| Potongan-potongan jaringan cincang dipertahankan pada 37 0C terus menerus sepanjang prosedur. | Potongan-potongan jaringan cincang awalnya dipertahankan pada suhu dingin dan kemudian dipertahankan pada 37 0. |
| Suhu | |
| Tripsinisasi hangat terjadi pada 36,5 - 37 0 | Tripsinisasi dingin terjadi pada suhu dingin es. |
| Waktu dikonsumsi | |
| Diperlukan lebih sedikit waktu untuk seluruh proses (sekitar 4 jam) trypsinization hangat. | Diperlukan waktu lebih lama (sekitar 6 - 24 jam) untuk trypsinization dingin. |
| Hasil sel yang layak | |
| Rendah dalam trypsinization hangat. | Tinggi dalam trypsinisasi dingin. |
| Penggunaan Sentrifugasi | |
| Sentrifugasi diperlukan untuk disagregasi sel dalam trypsinization hangat. | Sentrifugasi tidak diperlukan dalam trypsinization dingin. |
| Kuantitas Jaringan Awal untuk Tripsinisasi | |
| Sejumlah besar jaringan dapat digunakan dalam trypsinization hangat. | Sejumlah kecil jaringan dapat digunakan dalam trypsinization dingin. |
| Kerusakan sel | |
| Tinggi karena sentrifugasi pada trypsinization hangat. | Kurang karena trypsinization dingin. |
Ringkasan - Hangat vs. Dingin Tripsinisasi
Tripsinisasi adalah metode penggunaan enzim pendegradasi protein trypsin untuk disagregasi dan persiapan kultur sel primer selama proses kultur sel. Ada dua teknik utama tripsinisasi berdasarkan suhu yang digunakan selama prosedur. Mereka adalah trypsinization hangat dan dingin. Tripsinisasi hangat dilakukan di 37 0C sedangkan trypsinization dingin dilakukan di bawah kondisi dingin. Meskipun trypsinization dingin membutuhkan waktu lebih lama untuk penyelesaiannya, dikatakan memiliki hasil sel yang lebih tinggi. Hal ini disebabkan oleh fakta bahwa kerusakan sel diminimalkan dalam trypsinization dingin karena tidak menggunakan langkah-langkah sentrifugasi yang kuat. Inilah perbedaan antara trypsinisasi hangat dan dingin.
Referensi:
1. "Tripsinisasi." Tripsinisasi - Tinjauan Umum | Topik ScienceDirect. Tersedia disini
2. "Kultur Sel Primer: 3 Teknik (Dengan Diagram)." Diskusi Biologi, 16 Oktober 2015. Tersedia di sini
Gambar milik:
1.'Trypsin situs aktif'Dengan Fdardel - Pekerjaan sendiri, (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
