Perbedaan Antara T4 dan T7 DNA Ligase

Perbedaan Kunci - T4 vs T7 DNA Ligase

DNA ligase adalah enzim penting yang digunakan dalam teknik biologi molekuler. Berfungsi sebagai lem molekuler untuk bergabung dengan nukleotida dengan membentuk ikatan fosfodiester antara nukleotida. Ikatan fosfodiester terbentuk antara ujung hidroksil 3 'dari bagian gula dan gugus fosfat ujung 5'. Ligase DNA sangat penting dalam proses replikasi untuk bergabung dengan fragmen Okazaki dari untaian lagging dan selama mekanisme perbaikan DNA dan in vitro eksperimen kloning untuk menggabungkan gen yang diinginkan dengan genom vektor. Ada dua ligase DNA utama yang saat ini digunakan oleh ahli biologi molekuler: ligase DNA T4 dan T7. Ligase DNA T4 adalah salah satu enzim pertama yang diisolasi dari bakteriofag T4. Ligase DNA T7, yang merupakan protein lebih kecil, adalah enzim yang diisolasi dari bakteriofag T7. Ini adalah perbedaan utama antara ligase DNA T4 dan T7.

ISI

1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa Aksi DNA Ligase
3. Apa itu T4 DNA Ligase
4. Apa itu T7 DNA Ligase
4. Kesamaan Antara T4 dan T7 DNA Ligase
5. Perbandingan Berdampingan - T4 vs T7 DNA Ligase dalam Bentuk Tabular
6. Ringkasan

Apa itu Aksi DNA Ligase?

Ligasi DNA terjadi dalam reaksi tiga langkah. Langkah pertama adalah serangan nukleofilik pada alfa-fosfor ATP yang menghasilkan zat antara enzim-adenilat kovalen di mana AMP terkait dengan terminal nitrogen rantai-sisi lisin. Pada langkah kedua, serangan nukleofilik terjadi pada fosforus enzim-adenilat oleh substrat DNA yang dihentikan 5'-fosfat, melepaskan lisin dan membentuk DNA-adenilat. Pada langkah terakhir, DNA-adenilat diserang oleh 3'-OH untai DNA lain, melepaskan AMP dan bergabung dengan polinukleotida.

Apa itu T4 DNA Ligase?

T4 Ligase adalah ligase pertama yang diisolasi dan diidentifikasi oleh Meselson, Weigle, dan Kellenberger dan merupakan ligase komersial pertama yang diproduksi. T4 DNA ligase adalah enzim ATP dependen yang mengkatalisis pembentukan ikatan fosfodiester. Ini adalah rantai polipeptida tunggal dengan residu asam amino 487 dan memiliki berat molekul sekitar 77 kDa. PH optimum untuk aktivitasnya terletak pada kisaran 7,5 - 8.

Gambar 01: T4 DNA Ligase

T4 DNA Ligase, seperti namanya, hadir dalam bacteriophage T4 dan diisolasi ketika fage menghasilkan enzim pada saat infeksi dengan -E. coli. Enzim ligasi dupleks DNA untai ganda dengan ujung tumpul dan fragmen yang akan diikat harus berdekatan satu sama lain.

Apa itu T7 DNA Ligase?

T7 ligase adalah protein 41 kDa yang diproduksi oleh T7 Bacteriophage dan diisolasi dengan menginfeksi E. coli sel. Fungsi utama ligase T7 adalah untuk mengikat dupleks DNA melalui ikatan fosfodiester dan bergabung dengan fragmen DNA terdekat selama percobaan kloning. PH optimum untuk ligase DNA T7 terletak pada kisaran 7,0 - 7,2. Ligase T7 tergantung ATP. Ligase DNA T7 juga mampu menganil hibrida DNA dan RNA, sehingga menimbulkan konformasi abnormal selama transkripsi; Namun, fenomena ini masih dalam penelitian oleh in vitro studi.

Apa Kemiripan Antara T4 dan T7 DNA Ligase?

T4 dan T7 DNA Ligase berpartisipasi dalam reaksi ligasi dengan menganil dupleks DNA melalui pembentukan ikatan fosfodiester antara ujung OH 3 'dan ujung fosfat 5' dari fragmen DNA.
Kedua enzim ligate tumpul berakhir dupleks DNA yang berdekatan satu sama lain.
Kedua enzim tersebut bergantung pada ATP.
Enzim ini diisolasi dengan menginfeksi E. coli sel dengan bakteriofag tertentu.
Aplikasi kedua enzim meliputi:
- Kloning molekuler - untuk mengikat gen yang diinginkan dengan vektor
- Perbaikan DNA - untuk memperbaiki relung untai ganda
- Replikasi DNA in vitro
- Reaksi berantai ligase

Apa Perbedaan Antara T4 dan T7 DNA Ligase?

T4 vs T7 DNA Ligase
DNA T4 Jenis ligase dari DNA ligase yang diisolasi dari bakteriofag T4 dan terlibat dalam pengikisan fragmen DNA yang berdekatan melalui pembentukan ikatan fosfodiester.	DNA T7 Jenis ligase dari DNA ligase yang diisolasi dari bacteriophage T7 dan terlibat dalam pengikisan fragmen DNA yang berdekatan melalui pembentukan ikatan fosfodiester.
Ukuran Protein
Ukuran ligase DNA T4 adalah 77 kDa - lebih besar dibandingkan dengan ligase DNA T7.	Ukuran ligase DNA T7 adalah 41 kDa.
PH optimal
Rentang pH yang berfungsi T4 DNA ligase adalah 7,5 - 8,0.	Rentang pH yang berfungsi T7 DNA ligase adalah 7.0 - 7.2.

Ringkasan - T4 vs T7 DNA Ligase

Ligase DNA adalah kelas penting dari enzim yang terlibat dalam kloning molekul untuk menghasilkan molekul DNA rekombinan yang mengandung gen yang diinginkan. Reaksi ligasi adalah reaksi pemanfaatan energi dan ada penelitian baru yang sedang dilakukan untuk meningkatkan akurasi melalui modulasi ligase yang tersedia. Ligase DNA T4 dan T7 adalah dua jenis enzim ligase DNA penting yang digunakan dalam teknik biologi molekuler. Ligase DNA T7 juga merupakan hasil penelitian yang didasarkan pada ligase primer yang diisolasi dari T4 yang terinfeksi E. coli. T7 digambarkan lebih efisien dan akurat dalam menjalankan fungsinya karena ukurannya yang lebih kecil. Ini adalah perbedaan antara ligase T4 dan T7.

Unduh Versi PDF T4 vs T7 DNA Ligase

Anda dapat mengunduh versi PDF dari artikel ini dan menggunakannya untuk tujuan offline sesuai catatan kutipan. Silakan unduh versi PDF di sini Perbedaan Antara T4 dan T7 Ligase.

Referensi:

1. "DNA Ligase, T4." DNA Ligase, T4 - Manual Enzim Worthington, Tersedia di sini. Diakses 22 Agustus 2017.
2. Doherty, Aidan J., et al. "Bacteriophage T7 DNA Ligase OVEREXPRESSION, PURIFICATION, CRYSTALLISATION, DAN CHARACTERISATION." Jurnal Biologi Kimia, 10 Mei 1996, Tersedia di sini. Diakses 22 Agustus 2017.

Gambar milik:

1. "Gambar 3. Bantuan Belat Single Stranded mRNA-DNA T4 Ligase DNA Ligation." (CC BY 3.0) melalui Commons Wikimedia

Sains & Alam