Perbedaan Antara GFP dan EGFP

Itu perbedaan utama antara GFP dan EGFP adalah bahwa GFP adalah protein tipe liar yang tergabung dalam kloning molekuler sel non-mamalia sementara EGFP adalah tipe GFP yang diperbaiki atau direkayasa yang dapat digunakan pada sel mamalia.

Kloning molekuler adalah teknik canggih yang sangat banyak digunakan para ilmuwan dalam mengekspresikan protein melalui teknologi rekombinan. Dalam teknologi DNA rekombinan, penting untuk mentransformasikan vektor rekombinan agar berhasil menjadi inang organisme. Oleh karena itu, selama proses transformasi, harus diidentifikasi dan dikonfirmasi apakah gen yang diinginkan telah diubah atau tidak menjadi inang. Untuk menilai ini, ahli biologi molekuler mengadopsi beberapa teknik. Dari teknik-teknik itu, salah satunya adalah gen reporter. Gen reporter ini bertindak sebagai penanda yang dapat dipilih untuk memilih transforman yang benar. Dengan demikian, Green Fluorescent Protein (GFP) dan Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) adalah dua protein reporter yang digunakan dalam kloning molekuler.

ISI

1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa itu GFP
3. Apa itu EGFP
4. Kesamaan Antara GFP dan EGFP
5. Perbandingan Berdampingan - GFP vs EGFP dalam Bentuk Tabular
6. Ringkasan

Apa itu GFP??

GFP adalah protein tipe liar yang mengandung 238 residu asam amino dan beberapa daerah urutan asam amino yang dapat dipilih yang membedakannya dari protein fluoresen lainnya. Selanjutnya, protein tipe liar ini pada awalnya di isolasi dari Aequorea Victoria; sejenis ubur-ubur. Namun, dalam fenomena alam, ubur-ubur mampu menghasilkan fluoresensi warna hijau sebagai respons terhadap rangsangan tertentu.

Sebelumnya, konsep ini mengejutkan para ilmuwan, dan mereka memutuskan untuk menggunakannya pada teknologi DNA rekombinan mereka. Akibatnya, para ilmuwan menggunakan bentuk mutan gen tipe liar ini sebagai gen reporter dalam studi ekspresi gen mereka. Gen tipe liar GFP mampu menghasilkan protein yang memberikan fluoresensi pada suhu kamar atau di bawah sinar UV. Karena itu, ketika dimasukkan ke dalam transforman, itu mengekspresikan dan menghasilkan fluoresensi. Jika fluoresensi dihasilkan setelah proses transformasi, itu menegaskan keberhasilan proses transformasi. Dengan kata sederhana, emisi fluoresensi menandakan keberhasilan transformasi vektor yang membawa gen yang diinginkan menjadi inang.

Gambar 01: GFP

Karena alasan ini, GFP bertindak sebagai in vivo penanda ekspresi gen. Saat ini, teknik rekayasa genetika digunakan untuk menghasilkan GFP. Juga, banyak versi perbaikan GFP seperti EGFP tersedia. Oleh karena itu, ini memungkinkan penggunaan GFP yang efisien dalam studi kloning dan ekspresi gen.

Apa itu EGFP??

Enhanced Green Fluorescent Protein atau EGFP adalah versi perbaikan GFP. Dengan kata-kata sederhana, kita dapat mendefinisikan EGFP sebagai versi rekayasa GFP tipe liar. Ketika gen tipe liar GFP bermutasi, itu menghasilkan efek yang menguntungkan. Karenanya, gen mutasi GFP memungkinkan ekspresi karakter baru, dan sebagai hasilnya, kita dapat menghasilkan GFP yang Ditingkatkan dengan karakteristik yang ditingkatkan. Selain itu, kami dapat memperkenalkan mutasi dengan sukses ke gen GFP tipe liar menggunakan iradiasi atau metode kimia. Gen yang bermutasi ini kemudian menghasilkan EGFP, yang memiliki karakteristik lebih menguntungkan.

Gambar 02: EGFP

Peningkatan karakteristik EGFP adalah sebagai berikut;

• Mampu memancarkan sinyal fluoresensi yang lebih kuat.
• Memiliki sensitivitas tinggi.
• Dapat menggunakannya pada sel mamalia alih-alih prokariota dan eukariota tingkat rendah lainnya.
• Juga, memberikan peningkatan kemurnian produk.

Oleh karena itu, dibandingkan dengan GFP, EGFP adalah pilihan yang lebih disukai untuk studi ekspresi gen. Namun, produk ini lebih mahal dibandingkan dengan GFP.

Apa Persamaan Antara GFP dan EGFP?

• GFP dan EGFP adalah dua protein yang memiliki kemampuan memancarkan warna hijau
• Karena itu, keduanya berfungsi sebagai protein reporter dalam studi ekspresi gen.
• Juga, dimungkinkan untuk mensintesis keduanya menggunakan teknologi DNA rekombinan.
• Selain itu, mudah untuk lebih bermutasi dua jenis ini untuk mensintesis bentuk yang ditingkatkan.

Apa Perbedaan Antara GFP dan EGFP?

Gen reporter adalah gen yang melekat dengan gen yang diminati dalam teknologi DNA rekombinan. Ini menandakan keberhasilan transformasi vektor rekombinan menjadi inang. Di sini, GFP dan EGFP adalah dua jenis protein florescent hijau yang berfungsi sebagai protein reporter. Namun, perbedaan utama antara GFP dan EGFP adalah bahwa GFP adalah tipe liar sedangkan EGFP adalah versi GFP yang direkayasa. Selain itu, EGFP memiliki karakteristik yang lebih menguntungkan daripada GFP. Misalnya, EGFP menghasilkan cahaya neon yang lebih kuat dan lebih sensitif daripada GFP. Perbedaan lain antara GFP dan EGFP adalah sistem di mana kita dapat menggunakannya. Sistem non-mamalia menggunakan GFP sedangkan sistem mamalia menggunakan EGFP.

Infografis di bawah ini menyajikan perbedaan antara GFP dan EGFP dalam bentuk tabel.

Ringkasan - GFP vs EGFP

GFP dan EGFP adalah protein reporter dalam studi kloning dan ekspresi gen. GFP adalah protein tipe liar, yang merupakan protein fluorescent hijau. Protein awalnya terisolasi dari ubur-ubur Aequorea victoria. Sebaliknya, EFGP adalah bentuk protein GFP yang disempurnakan. Ini adalah mutan dari tipe liar dengan karakteristik yang ditingkatkan. Karenanya, EFGP memiliki kekuatan sinyal yang lebih tinggi dan sensitivitas yang lebih tinggi. Oleh karena itu, kita dapat menggunakannya pada vektor mamalia. Sebaliknya, penggunaan GFP terutama hanya pada vektor non-mamalia. Secara keseluruhan, ini adalah perbedaan antara GFP dan EGFP.

Referensi:

1. Cinelli, R A, et al. “Protein Fluoresen Hijau yang Ditingkatkan sebagai Alat untuk Analisis Dinamika dan Lokalisasi Protein: Studi Fluoresensi Lokal di Tingkat Molekul-Tunggal.” Fotokimia dan Fotobiologi., Perpustakaan Kedokteran Nasional AS, Juni 2000. Tersedia di sini  
2. "PDB101: Molekul Bulan Ini: Green Fluorescent Protein (GFP)." RCSB: PDB-101. Tersedia disini

Gambar milik:

1. "GFP Fluorescent Protein Movie" oleh Erin Rod - Pekerjaan sendiri, (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia 
2. "CA2 amigo2 eGFP mouse" Oleh Dudek, Serena; Curuana, Douglas; Carstens, Kelly - Pekerjaan sendiri, (CC BY-SA 3.0) melalui Commons Wikimedia