Perbedaan Antara Ekstraksi DNA dan RNA

Perbedaan utama - Ekstraksi DNA vs RNA
 

Studi tentang DNA dan RNA adalah aspek-aspek penting untuk memahami konsep dasar biologi molekuler, bioteknologi, dan genetika. Ekstraksi sampel DNA dan RNA murni diperlukan untuk melakukan prosedur eksperimental selama studi ini. Perbedaan utama antara ekstraksi DNA dan RNA adalah itu Proses ekstraksi DNA memurnikan DNA sementara ekstraksi RNA memurnikan RNA. Proses ekstraksi DNA memiliki tiga langkah berbeda: lisis sel dan katabolisme lipid dan protein membran, penggumpalan katabolit dengan larutan garam pekat, dan pengendapan DNA dengan etanol. Prosedur tiga langkah dapat terdiri dari dua langkah opsional. Proses pemurnian RNA terdiri dari empat langkah yang berbeda: penambahan guanidium thiocyanate untuk lisis sel, denaturasi protein termasuk ribonucleases, pemisahan RNA dengan penambahan chloroform dan fenol dan pencucian endapan menggunakan etanol.

ISI

1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa itu Ekstraksi DNA
3. Apa itu Ekstraksi RNA
4. Kesamaan Antara Ekstraksi DNA dan RNA
5. Perbandingan Berdampingan - Ekstraksi DNA vs RNA dalam Bentuk Tabular
6. Ringkasan

Apa itu Ekstraksi DNA?

Ekstraksi DNA adalah proses fisik dan kimia yang digunakan untuk memurnikan DNA dari sampel. Ekstraksi DNA merupakan aspek penting dalam konteks biologi molekuler dan ilmu forensik. Prosesnya terdiri dari tiga langkah dasar. Awalnya, sel-sel yang menarik harus diperoleh. Selanjutnya, lisis sel difasilitasi untuk menghancurkan membran sel, yang membuka sel dan mengekspos sitoplasma bersama dengan DNA. Surfaktan atau deterjen lain dapat digunakan untuk melisiskan lipid dari membran sel sementara protein yang ada dikatabolisme oleh protease. Ini merupakan langkah opsional. Setelah sel dilisiskan, penggumpalan molekul katabolisasi difasilitasi oleh larutan garam pekat. Ini diikuti oleh sentrifugasi larutan yang memisahkan rumpun puing dari DNA. Pada tahap ini, DNA terdiferensiasi dicampur dengan reagen dan garam yang digunakan selama siklus sel.

Gambar 01: Ekstraksi DNA

Untuk memurnikannya lebih lanjut, langkah-langkah berikut dapat digunakan. Salah satu metode adalah pengendapan etanol, yang melibatkan pencampuran etanol es dingin dengan sampel DNA yang dipisahkan. DNA tidak larut dalam alkohol dan dengan demikian menghasilkan pelet karena agregasi molekul DNA bersama. Natrium asetat ditambahkan dalam proses ini untuk meningkatkan derajat presipitasi dengan meningkatkan kekuatan ionik. Selain proses presipitasi etanol, proses ekstraksi fenol-kloroform juga dapat diinduksi untuk ini. Dalam metode ini, fenol mendenaturasi protein yang ada dalam sampel. Setelah disentrifugasi, protein terdenaturasi akan tetap dalam fase organik sementara molekul DNA yang dicampur dengan kloroform akan hadir dalam fase berair. Kloroform akan menghilangkan residu fenol. Setelah ekstraksi selesai, DNA disimpan dilarutkan dalam buffer TE atau air ultra murni.

Apa itu Ekstraksi RNA?

Pemurnian RNA adalah proses dimana RNA dimurnikan dari sampel biologis. Karena adanya ribonuklease dalam sel dan jaringan, proses ini rumit. Enzim ribonuklease memiliki kemampuan untuk mendegradasi RNA dengan cepat. Sifat kimiawi dari ribonucleases sangat stabil, dan sulit untuk menonaktifkannya. Menetralisir ribonukleas adalah pilihan. Karena enzim ini ada di mana-mana dalam sel dan jaringan, teknik khusus dikembangkan untuk ekstraksi RNA. Dari banyak metode, metode umum adalah ekstraksi Guanidinium thiocynate-phenol-chloroform.

Gambar 02: Ekstraksi RNA

Metode ekstraksi Guanidinium tiosin-fenol-kloroform tergantung pada sentrifugasi dan pemisahan fasa. Campuran yang akan disentrifugasi terdiri dari sampel berair dan larutan jenuh air yang terdiri dari fenol dan kloroform. Setelah disentrifugasi, larutan terdiri dari fase berair atas dan fase organik lebih rendah dalam kondisi pH netral (pH 7-8). RNA hadir dalam fase air. Fase organik biasanya terdiri dari protein yang dilarutkan dalam fenol dan lipid yang dilarutkan dalam kloroform. Agen chaotropic (molekul yang memiliki kemampuan untuk memutuskan ikatan hidrogen antara molekul air) ditambahkan; ini dikenal sebagai, tiosianat guanidinium. Agen ini memiliki kemampuan untuk mendenaturasi protein yang meliputi ribonukleas yang dapat menurunkan RNA dan terlibat dalam lisis sel. Ini juga memisahkan rRNA dari protein ribosom. Langkah terakhir dari pemurnian RNA adalah mencuci presipitasi fase berair dengan etanol. RNA juga bisa dimurnikan menggunakan nitrogen cair.

Apa Persamaan Antara Ekstraksi DNA dan RNA?

• Kedua proses ekstraksi menggunakan bahan kimia berbahaya seperti fenol dan kloroform.
• Sentrifugasi adalah teknik penting untuk kedua proses.
• Etanol digunakan untuk mencuci endapan dan untuk mendapatkan DNA atau RNA murni.

Apa Perbedaan Antara Ekstraksi DNA dan RNA?

Ekstraksi DNA vs RNA
Ekstraksi DNA adalah proses yang mengekstraksi DNA dari suatu organisme atau sampel.	Ekstraksi RNA adalah proses yang mengekstraksi RNA dari sampel.
Langkah
Proses ekstraksi DNA terdiri dari tiga langkah berbeda dengan dua langkah opsional.	Proses ekstraksi RNA terdiri dari empat langkah berbeda.
Reagen
Surfaktan, protease (opsional), alkohol, kloroform, fenol, natrium asetat digunakan untuk ekstraksi DNA.	Guanidium tiosianat, kloroform, fenol, etanol digunakan untuk ekstraksi RNA.

Ringkasan - Ekstraksi DNA vs RNA

Ekstraksi DNA dan RNA adalah aspek penting dari prosedur eksperimental untuk studi biologi molekuler, genetika, dan bioteknologi. Kedua proses tersebut melibatkan pereaksi yang serupa, tetapi ekstraksi RNA menggunakan pereaksi khusus yang dikenal sebagai Guanidium thiocyanate yang mengurangi aktivitas ribonucleases. Ini adalah perbedaan utama antara ekstraksi DNA dan RNA.

Unduh Versi PDF dari Ekstraksi DNA vs RNA

Anda dapat mengunduh versi PDF dari artikel ini dan menggunakannya untuk tujuan offline sesuai catatan kutipan. Silakan unduh versi PDF di sini Perbedaan Antara Ekstraksi DNA dan RNA

Referensi:

1. Chomczynski, P, dan N Sacchi. "Metode Single-step isolasi RNA dengan ekstraksi asam guanidinium thiocyanate-Phenol-Chloroform." Biokimia Analitik., Perpustakaan Kedokteran Nasional AS, April 1987, Tersedia di sini. Diakses 31 Agustus 2017
2. Hindawi. "Ekstraksi DNA, RNA, dan Protein: Masa Lalu dan Sekarang." BioMed Research International, Hindawi, 30 November 2009, Tersedia di sini. Diakses 31 Agustus 2017.

Gambar milik:

1. "DNA diekstraksi dari alpukat" Oleh Mike Seyfang - awalnya diposting ke Flickr sebagai sukses (CC BY 2.0) melalui Commons Wikimedia
2. "Ekstraksi PhOH-CHCl3" Oleh Squidonius (bicara) - Karya sendiri (Teks asli: buatan sendiri) (Domain Publik) via Commons Wikimedia