Perbedaan Antara Imunofluoresensi Langsung dan Tidak Langsung

Itu perbedaan utama antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung adalah bahwa imunofluoresensi langsung menggunakan antibodi tunggal yang bekerja terhadap target yang diinginkan sedangkan imunofluoresensi tidak langsung menggunakan dua antibodi untuk memberi label target yang diinginkan..

Imunofluoresensi atau pencitraan sel adalah teknik yang digunakan untuk melabeli antigen target spesifik dengan fluorofor. Di sini, fluorofor adalah senyawa kimia fluoresen yang dapat memancarkan kembali cahaya pada eksitasi cahaya. Ketika fluorophore berikatan dengan antigen target, ia memungkinkan pendeteksian molekul target dalam sampel. Untuk menggambarkannya lebih lanjut, ketika sebuah antigen berikatan dengan antibodi spesifik, ia dapat dikonjugasikan dengan fluorofor. Oleh karena itu, mudah untuk mendeteksi keberadaan antigen target dalam sampel ketika mengamati di bawah mikroskop fluoresensi.

Selain itu, ada dua jenis imunofluoresensi; imunofluoresensi langsung dan tidak langsung. Perbedaan antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung terutama terletak pada jumlah antibodi yang digunakan dan konjugasi fluorofor. Yaitu, dalam imunofluoresensi langsung, fluorofor langsung berkonjugasi dengan antibodi primer sedangkan pada imunofluoresensi tidak langsung, fluorofor terkonjugasi dengan antibodi sekunder.

ISI

1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa itu Imunofluoresensi Langsung
3. Apa itu Imunofluoresensi Tidak Langsung
4. Kesamaan Antara Imunofluoresensi Langsung dan Tidak Langsung
5. Perbandingan Berdampingan - Imunofluoresensi Langsung vs Tidak Langsung dalam Bentuk Tabular
6. Ringkasan

Apa itu Imunofluoresensi Langsung?

Imunofluoresensi menggunakan antibodi untuk mendeteksi antigen target spesifik. Imunofluoresensi langsung adalah salah satu dari dua jenis imunofluoresensi. Dalam imunofluoresensi langsung, satu antibodi (antibodi primer) terlibat dan fluorofor langsung berkonjugasi dengan antibodi primer. Setelah mengikat antibodi dengan antigen target, fluorophore memancarkan fluoresensi yang dapat dideteksi oleh mikroskop fluoresensi.

Gambar 01: Imunofluoresensi Langsung

Namun, imunofluoresensi langsung adalah metode yang mahal karena antibodi terkonjugasi primer lebih mahal dibandingkan dengan antibodi sekunder. Namun demikian, itu tidak melibatkan langkah tambahan karenanya, teknik yang lebih pendek. Selanjutnya, ikatan yang tidak spesifik berkurang dalam imunofluoresensi langsung. Karenanya, reaktivitas silang spesies rendah. Tetapi dalam deteksi, sensitivitas imunofluoresensi langsung lemah dibandingkan dengan imunofluoresensi tidak langsung .

Apa itu Imunofluoresensi Tidak Langsung?

Imunofluoresensi tidak langsung adalah tipe kedua dari imunofluoresensi yang melibatkan dua jenis antibodi seperti antibodi primer dan sekunder dalam pelabelan antigen target. Dalam metode ini, fluorophore berkonjugasi dengan antibodi sekunder. Karenanya, teknik ini melibatkan langkah tambahan.

Gambar 02: Imunofluoresensi

Namun, sensitivitasnya tinggi dalam metode ini karena beberapa fluorofor dapat dikonjugasikan dengan antibodi sekunder dan itu membuat deteksi lebih mudah. Lebih lanjut, imunofluoresensi tidak langsung lebih murah karena fakta bahwa konjugasi antibodi sekunder lebih murah dan lebih mudah. Dibandingkan dengan imunofluoresensi langsung, reaktivitas silang spesies tinggi dalam metode tidak langsung.

Apa Persamaan Antara Imunofluoresensi Langsung dan Tidak Langsung?

• Mereka adalah dua jenis teknik imunofluoresensi.
• Antibodi primer dan fluorofor terlibat dalam kedua metode.
• Juga, reaksi antigen-antibodi terjadi pada kedua metode.
• Lebih lanjut, baik imunofluoresensi langsung dan tidak langsung menggunakan mikroskop fluoresensi untuk mendeteksi antigen.

Apa Perbedaan Antara Imunofluoresensi Langsung dan Tidak Langsung?

Imunofluoresensi dapat langsung atau tidak langsung berdasarkan konjugasi fluorofor dengan antibodi yang digunakan. Dalam imunofluoresensi langsung, fluorofor berkonjugasi dengan antibodi primer, yang merupakan antibodi tunggal yang terlibat dalam teknik ini. Berbeda dengan itu, dalam imunofluoresensi tidak langsung, fluorofor berkonjugasi dengan antibodi sekunder, yang merupakan salah satu dari dua jenis antibodi yang terlibat dalam teknik ini. Oleh karena itu, perbedaan utama antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung adalah jenis antibodi yang berkonjugasi dengan fluorofor..

Infografis berikut memberikan perbandingan berdampingan dari perbedaan antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung.

Ringkasan - Imunofluoresensi Langsung vs. Tidak Langsung

Imunofluoresensi adalah teknik yang digunakan untuk mendeteksi keberadaan antigen spesifik dalam sampel. Teknik ini menggunakan antibodi spesifik. Oleh karena itu, dalam hal ini, antibodi terkonjugasi dengan fluorofor untuk mendeteksi mereka menggunakan mikroskop fluorescent. Selain itu, ada dua jenis imunofluoresensi yaitu, imunofluoresensi langsung dan tidak langsung. Imunofluoresensi langsung melibatkan antibodi tunggal dan fluorofor yang secara langsung terkonjugasi dengan antibodi ini. Imunofluoresensi tidak langsung melibatkan dua antibodi; primer dan sekunder dan fluorofor terkonjugasi ke antibodi sekunder. Karena beberapa antibodi sekunder dapat mengikat dengan antibodi primer dan beberapa fluorofor dapat berkonjugasi dengan antibodi sekunder, imunofluoresensi tidak langsung merupakan metode yang lebih sensitif daripada metode langsung. Selain itu, metode tidak langsung lebih murah daripada metode langsung. Dengan demikian, ini adalah perbedaan antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung.

Referensi:

1. "Imunofluoresensi." Wikipedia, Wikimedia Foundation, 19 Agustus 2018. Tersedia di sini 

Gambar milik:

1. "HSP IF IgA" Oleh Emmanuelm di en.wikipedia, (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia
2. ”Immunofluorescence” Oleh Westhayl618 - Pekerjaan sendiri, (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia