Perbedaan Antara Kloning dan Subkloning

Perbedaan Utama - Kloning vs Subkloning
 

Kloning dan Subkloning adalah prosedur biologis molekuler yang menciptakan sel atau organisme yang identik secara genetik yang mengandung DNA atau gen yang menarik. Kloning adalah teknik yang melibatkan penyisipan gen atau DNA yang tertarik ke dalam vektor, replikasi di dalam bakteri inang, dan produksi sel atau organisme yang merupakan salinan tepat dari susunan genetik. Subkloning adalah teknik yang melibatkan penyisipan gen yang diinginkan, yang sudah dimasukkan ke dalam vektor, ke dalam vektor sekunder, replikasi di dalam bakteri inang, dan produksi salinan sel atau organisme yang identik secara genetis. Perbedaan utama antara kloning dan subklon adalah itu, dalam kloning, gen yang diinginkan, setelah diikat ke dalam vektor, melanjutkan proses kloning sementara, dalam subkloning, gen yang sudah dikloning dipisahkan dari vektor induk dan dimasukkan lagi ke dalam vektor penerima dan melanjutkan proses.

ISI
1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa itu Kloning
3. Apa itu Subkloning
4. Perbandingan Berdampingan - Kloning vs Subkloning
5. Ringkasan

Apa itu Kloning??

Kloning adalah prosedur yang menghasilkan organisme atau sel yang identik secara genetis. Di alam, kloning terjadi dalam cara reproduksi aseksual. Ketika tidak ada rekombinasi atau perubahan genetik, sel anak perempuan menerima susunan genetik yang sama dari induknya. Organisme prokariotik dan eukariotik membuat klon dengan pembelahan biner, tunas, mitosis, dll. Dalam biologi molekuler, gen kloning atau fragmen spesifik DNA adalah metode populer untuk mempelajari struktur dan fungsi bagian DNA tertentu.

Tujuan utama dari kloning molekuler adalah untuk membuat jutaan salinan sel atau organisme yang identik secara genetik yang mengandung fragmen DNA yang menarik (terutama gen). Ini menciptakan organisme dengan salinan genetik yang tepat dari yang lain. Terutama, gen spesifik dikloning dalam studi molekuler untuk mendapatkan informasi struktural dan fungsional dan untuk sekuensing DNA. Juga, untuk produksi protein atau produk spesifik dalam skala besar, kloning banyak digunakan.

Prosedur Kloning

Langkah-langkah dasar prosedur kloning adalah sebagai berikut.

1. Identifikasi dan isolasi gen yang diinginkan. (Amplifikasi gen yang diminati oleh PCR).
2. Restriksi pencernaan gen yang diinginkan (Pembatasan endonuklease potong gen).
3. Pembatasan pencernaan DNA vektor. (Vektor DNA juga dipotong menggunakan restriksi endonuklease yang sama).
4. Penyisipan gen ke dalam vektor dan pembentukan molekul rekombinan.
5. Transformasi vektor rekombinan menjadi bakteri inang.
6. Isolasi dan identifikasi bakteri yang ditransformasi (vektor plasmid harus mengandung gen yang dapat dipilih, paling umum gen resistensi antibiotik untuk menyaring bakteri yang ditransformasi).
7. Ekspresi gen rekombinan dalam inang.

Gambar_01: Prosedur Kloning

Apa itu Subkloning?

Subkloning adalah prosedur memindahkan gen yang diinginkan dari satu vektor ke vektor lain untuk melihat ekspresi gen untuk mendapatkan fungsionalitas gen yang diinginkan. Dalam metode ini, dua vektor dilibatkan; yaitu, vektor induk dan vektor tujuan. Sisipan yang dikloning dipindahkan lagi ke vektor kedua dalam subkloning. Tujuan mentransfer gen dari vektor pertama ke vektor kedua adalah untuk mendapatkan sesuatu yang tidak dapat dilakukan oleh vektor pertama atau untuk memisahkan gen lagi dalam fragmen DNA yang sudah dikloning dan mengekspresikannya sendiri. Enzim restriksi digunakan dalam prosedur ini di awal.

Prosedur Subkloning

Langkah-langkah dasar subcloning adalah sebagai berikut.

1. Dengan bantuan restriksi endonuklease, pemisahan DNA yang menarik pada donor plasmid (vektor induk).
2. Amplifikasi DNA yang menarik menggunakan PCR.
3. Pemurnian produk PCR (DNA yang menarik) dengan elektroforesis gel.
4. Pembukaan plasmid penerima dengan endonucleases restriksi yang sama digunakan untuk memisahkan DNA yang diminati dalam plasmid induk.
5. Ligasi DNA yang diminati (gen) ke dalam plasmid penerima untuk membuat plasmid subklon.
6. Transformasi vektor yang disubkloning menjadi bakteri inang yang kompeten.
7. Penapisan sel yang ditransformasikan.
8. Pemurnian DNA plasmid dan digunakan untuk sekuensing DNA atau ekspresi gen untuk mendapatkan produk yang diinginkan.

Subkloning dilakukan pada kesempatan mengisolasi satu gen dari kelompok gen yang dikloning atau ketika gen yang diinginkan diperlukan untuk ditransfer ke dalam plasmid yang berguna untuk melihat fungsi persis gen yang diinginkan..

Gambar_02: Prosedur Subkloning

Apa perbedaan antara Kloning dan Subkloning?

Kloning vs Subkloning
Kloning adalah prosedur yang menghasilkan organisme atau sel yang identik secara genetis.	Subkloning adalah prosedur memindahkan gen yang diinginkan dari satu vektor ke vektor lain untuk melihat ekspresi gen untuk mendapatkan fungsionalitas gen yang diinginkan..
Proses
Pisahkan DNA yang diinginkan dari organisme dan dimasukkan ke dalam vektor satu kali dan kloning	DNA yang sudah dikloning dipisahkan dari vektor pertama dan dimasukkan ke vektor kedua dan dikloning.
Masukkan Gerakan melalui Vektor
Tidak memindahkan sisipan (DNA yang menarik) dari satu vektor ke vektor lainnya.	Pindahkan sisipan dari vektor induk ke vektor tujuan.

Ringkasan - Kloning vs Subkloning

Kloning menciptakan sel atau organisme yang identik secara genetis dengan gen atau DNA yang disisipkan. Ini hasil melalui pemisahan dan penyisipan DNA yang menarik ke dalam vektor dan ekspresi dalam bakteri inang. Subkloning berbagi langkah-langkah serupa dengan kloning. Namun, dalam subkloning, fragmen DNA yang sudah dikloning (gen yang diinginkan) dimasukkan ke dalam vektor dan diubah menjadi bakteri inang. Itulah perbedaan utama antara kloning dan subkloning.

Referensi

1. Lodish, Harvey. "Kloning DNA dengan Vektor Plasmid." Biologi Sel Molekuler. Edisi ke-4. Perpustakaan Kedokteran Nasional A.S., 01 Januari 1970. Web. 05 Maret 2017
2. "Subkloning." Wikipedia. Wikimedia Foundation, 14 Februari 2017. Web. 06 Maret 2017
3. "Subkloning." Subkloning | Buka artikel Access | Buka jurnal Akses | Prosiding Konferensi | Editor | Penulis | Peninjau | acara ilmiah. N.p., n.d. Web. 06 Maret 2017
4. Wackerhage, Henning. "Cara subclone." Cara subclone. N.p., 01 Januari 1970. Web. 06 Maret 2017

Gambar milik

1. Prosedur Kloning Molekul - Oleh CNX OpenStax [CC BY 4.0], melalui Wikimedia Commons
2. Prosedur Subkloning - By Uploader asli adalah Takometer di Wikipedia bahasa Inggris (Ditransfer dari en.wikipedia ke Commons.) [CC BY 2.5], via Wikimedia Commons